LABORATORIO DE BIOLOGÍA
(Programación de la actividad)
Profesor: Rafael Bravo Bellido
INTRODUCCIÓN
El objetivo de esta práctica es que el alumnado tome conciencia de lo que son las bacterias patógenas y de su influencia en la salud de las personas. De ahí la importancia de lavarse adecuadamente las manos (con jabón, después del ir al baño y siempre antes de tomar alimentos) y de cepillarse bien los dientes después de las comidas principales o cuando se ingieren golosinas.
Esta experiencia se va a desarrollar en dos sesiones de hora y media cada una, aproximadamente. La primera va a consistir en la preparación del medio de cultivo y la posterior siembra bacteriana. Tras esperar un mínimo de 48 horas se realizará la segunda sesión, durante la cual se prepararán muestras de las colonias que hayan crecido y se observarán al microscopio.
MATERIAL
Placas de Petri
Agua con extracto de carne, esterilizada
Agar
Glucosa
Microondas
Vaso de precipitados
Pinza grande
Pinza de madera
Rotulador permanente
Incubadora
Mechero de laboratorio
Cerillas
Pocillo de tinción
Portaobjetos
Cubreobjetos
Asa
Alcohol
Azul de metileno
Microscopio de luz
PROCEDIMIENTO
Primera sesión. Preparación del medio de cultivo y siembra.
Se esteriliza el interior de las placas de Petri con alcohol y se tapan.
En la base de cada placa (excepto la de control) y por su parte externa señalar, con el rotulador permanente, dos pequeñas áreas circulares: en una de ellas escribimos la letra “D” (dedo) y en la otra la letra “B” (boca). Cada alumno escribe también las iniciales de su nombre y apellidos.
Poner a calentar el agua en el vaso de precipitados. Cuando esté en ebullición, añadir el agar y la glucosa (cantidad: una cuchara pequeña rasa de agar y una pequeña porción de glucosa) y se remueve con la cucharilla hasta su homogeneización.
Verter el agar líquido en cada placa de Petri. Poner la tapa y esperar que solidifique.
Se apartará una placa de Petri como control.
La placa de control no se abrirá en ningún momento. En el resto de las placas de Petri, cada alumno sembrará las bacterias de la siguiente forma:
Quitar la tapa y en el área marcada como “D”, tocar con un dedo la superficie del agar y tapar.
Con el asa esterilizada con alcohol, frotarse entre los dientes e inmediatamente quitar la tapa, tocar con el asa en el área señalada como “B” y tapar de nuevo.
Colocar todas las placas de Petri en la incubadora, boca-abajo, a 37 ºC durante 48 horas.
Segunda sesión. Preparación de muestras y observación al microscopio.
Poner una gota de agua en el centro del portaobjetos.
Abrir la placa de Petri y con el asa tomar una pequeña muestra de una de las colonias. Tapar inmediatamente.
Extender lo recogido en el asa sobre la gota de agua del portaobjetos.
Echar dos gotas de alcohol sobre la muestra y dejar secar al aire.
Calentar suavemente sin que se queme la muestra. Dejar enfriar.
Echar sobre la muestra dos gotas de azul de metileno y esperar tres minutos.
Lavar el exceso de colorante con agua.
Colocar el cubreobjetos.
Observar al microscopio a 640 aumentos.
RESULTADOS ESPERADOS
Tras pasar las placas de Petri 48 horas en la incubadora deben observarse diferentes colonias bacterianas, identificables como círculos de colores, en las zonas donde se produjo la siembra. Es posible también que aparezca algún hongo debido a contaminación al manipular las placas durante el desarrollo de la práctica.
Al mirar por el microscopio deberá observarse una gran cantidad de bacterias, identificables por su forma esférica (cocos) o alargada (bacilos), intensamente teñidas de azul.
